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        在實驗室如何取得提取RNA(材料任選)

        日期:2025-07-10 08:06
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        摘要:

        植物病毒的RNA提取:
        大多植物病毒RNA為單鏈RNA,并且其極性與mRNA極性相同,植物病毒RNA提取較為簡單,一般使用酚氯仿即可獲得滿意結(jié)果。 
          一、材料 
          提純TMV病毒液(10mg/ml)。 
          二、設(shè)備 
          冷凍臺式離心機,低溫真空干燥儀,電泳儀,電泳槽。 
          三、試劑 
          TE-飽和酚:氯仿(1:1),氯仿,3M NaAc(pH5.2),乙醇(100%和70%),TE緩沖液,無RNA酶的雙菌水。 
          四、操作步驟 
          1、取一eppendorf管參入提純TMV(10mg/ml)400ml,再參入等體積酚/氯仿,蓋緊管蓋后用手充分振蕩1分鐘,4℃下12000g離心10分鐘。
          2、吸取水相于一新eppendorf管,再用酚/氯仿抽提,直至水相和有機相交界面無蛋白為止。
          3、吸取水相于新eppendorf心管,參入等體積氯仿,用手倒置離心管數(shù)十秒,4℃下12000g離心10分鐘。
          4、取水相,參入1/10倍體積的3mol/L NaAc(pH5.2),2.5倍體積的冰冷乙醇,混勻,-20℃30分鐘。 
          5、4℃下12000g離心15分鐘,小心棄去上清液,用70%乙醇洗滌沉淀,4℃下12000g離心5分鐘。
          6、小心棄去上清液,沉淀真空干燥5分鐘或空氣干燥10分鐘,并溶于無RNA酶的雙菌水或TE緩沖液中。
          7、取10ml運行電泳分析,另10ml用于cDNA合成。 
          [注意] 1、整個操作應(yīng)盡可能在低溫下運行。 
          2、由于病毒RNA鑲嵌于外殼蛋白里面,因此要充分剝?nèi)ゲ《就鈿さ鞍祝话阈枰啻芜\行酚/氯仿的抽提。
        
         

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